Equipements

Le LSRII™ est équipé de 3 LASER à alignement fixe, séparés spatialement. L’émission de fluorescence est collectée jusqu’aux détecteurs de type octogone et trigone. Cette configuration permet l’analyse simultanée de 11 paramètres de fluorescence. L’électronique digitale permet une meilleure résolution des signaux et augmente considérablement la sensibilité de détection. Ces deux aspects permettent une haute vitesse d’acquisition sans perte de qualité (30 000 évènements maximum par seconde). C’est également la possibilité de réaliser les compensations automatiques, en temps réel ou en différé.

Le pilotage de la station et l’acquisition des données sont réalisés avec le logiciel BD FACSDiva 6.1.2.

 

LASER	PMT	Dichroïc	Filtre		Désignation Diva	Fluorochrome commun Liste non exhaustive
488 nm	A	755 dLP	780 / 60 BP	750 - 810	PE - Cy7	PeCy7
22 mW	B	685 dLP	695 / 40 BP	675 - 715	PerCP - Cy5.5,	PerCP, PE-Cy5.5, Draq 5
	C	655 dLP	660 / 20 BP	650 - 670	PE - Cy5	7-AAD
	D	600 dLP	610 / 20 BP	600 - 620	PE - Texas Red	IP
	E	550 dLP	575 / 26 BP	562 - 588	PE	Pyronine Y
	F	505 dLP	530 / 30 BP	515 - 545	FITC	Alexa 488, GFP, YFP, Zombie Green, JC-1 (monomere), SYTOX Green, TO-PRO-1
	G		488 / 10 BP	483 - 493	SSC	SSC
633 nm	A	755 dLP	780 / 60 BP	750 - 810	APC - Cy7	APC - Cy7, Zombie NIR
17 mW	B	710 dLP	730 / 45 BP	707 - 750	Alexa Fluor 700	Cy5.5
	C		660 / 20 BP	650 - 670	APC	Alexa 633, Alexa 647, Cy5, TO - PRO - 3
355 nm	A	505 dLP	530 / 30 BP	515 - 545	Indo-1 (bleu)	Indo-1 (bleu)
20 mW	B		450 / 30 BP	435 - 465	Indo-1 (violet)	DAPI, Hoechst, Pacific Blue

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Le Gallios est équipé de 3 LASER à alignement fixe, séparés spatialement. Le banc optique de type boulevard permet une transmission de la fluorescence proche de 100% avec ses filtres de réflexion positionnés à 18°. Il permet de mesurer jusqu’à 10 paramètres de fluorescence. La cellule d’écoulement en quartz est couplée au moyen d’un gel à des lentilles de collection d’ouverture numérique de 1,2. Il est possible d’adapter l’angle de collection de la lumière diffractée à la taille des éléments analysés grâce à 2 photodiodes indépendantes. Il est ainsi possible de distinguer entre elles des particules submicrométriques (0,4 er 0,5 µm). L’enregistrement des données sur 20 bits permet des compensations de haute précision. Le passeur de tube de type carrousel permet d’analyser automatiquement jusqu’à 32 tubes. Avant chaque analyse l’échantillon est remis en suspension au moyen d’un vortex incorporé. La vitesse d’acquisition maximale est de 25 000 évènements par seconde et jusqu’à 24.106 évènements stockés par fichier (ce chiffre varie en fonction du nombre de paramètres sauvegardés).

Le pilotage de la station et l’acquisition des données sont réalisés avec le logiciel Kaluza G.

 

LASER	PMT	Dichroïc	Filtre		Désignation standard	Fluorochrome commun Liste non exhaustive
488 nm	Filtre 1	550 dSP	525 / 40 BP	505 - 545	FITC	Alexa 488, GFP, YFP, Zombie Green, JC-1 (monomere), Sytox Green, TO-PRO-1
22 mW	Filtre 2	595 dSP	575 / 30 BP	560 - 590	PE	PE, Alexa 546, DiOC, DyeCycle Orange, SNARF
	Filtre 3	655 dSP	620 / 30 BP	605 - 635	PE-Texas Red	PE-Texas Red, PI, DiOC
	Filtre 4	730 dSP	695 / 30 BP	680 - 710	PE - Cy5.5	PE-Cy5.5, PerCP-Cy5.5, Alexa 700, Tri-Color, 7-AAD,
	Filtre 5		755 LP		PE - Cy7	Alexa 750
638 nm	Filtre 6	710 dSP	660 / 20 BP	650 - 670	APC	Alexa 647, Cy5, TO-PRO-3, Sytox Red
25 mW	Filtre 7	750 dSP	725 / 20 BP	715 - 735	Alexa 700	Alexa 700
	Filtre 8		755 LP	755 LP	APC - Cy7,	APC-Alexa 750, APC-H7
405 nm	Filtre 9	480 dSP	450 / 40 BP	430 - 470	Pacific Blue	Alexa 405, PO-PRO-1, DyeCycle Violet
40 mW	Filtre 10		550 / 40 BP	530 - 570	SYTOX blue	AmCyan

d : Dichroïque – LP : Long Pass – SP : Short Pass - BP : Band Pass

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Le MoFlo Astrios est un trieur haut de gamme ultra-rapide. Il est équipé de 5 LASER fibrés (hormis le LASER U.V.) et décalés spatialement. Les émissions de fluorescences sont collectées par des fibres optiques placées en sortie de pinhole. La configuration du banc optique de type « precision Optical Device » permet de mesurer jusqu’à 16 paramètres de fluorescence. De conception « jet in air » l’Astrios peut atteindre une vitesse de tri de 70 000 évènements par seconde.
Les performances du système sont remarquables tant au niveau de la qualité de rendement et de pureté, de la vitesse d’acquisition et de tri, que de la capacité du traitement et du stockage des signaux.
Les signaux sont digitalisés à une fréquence de 100 MHz sur 32 bits (jusqu’à 100 000 évènements par seconde en analyse). En mode logarithmique, la gamme dynamique de mesure des signaux s’étend sur 5 décades (0,0001 à 10 volts). Il est possible d’activer simultanément 6 jets de tris, soit de trier six populations, selon des mode définis individuellement (single cell, pureté, enrichissement et mixte).

Le système est équipé d’un module de clonage.
Les supports de tube pour l’échantillon sont multiples et il est possible de programmer son agitation.
La récupération des fractions triées dans des plaques multi-puits, sur des lames ou dans différents types de tubes s’effectue grâce à un bras robot. L’échantillon et les fractions collectées peuvent être maintenus dans un environnement où la température est régulée. Un jeu de buses de diamètre variable (50 à 200 µm) permet d’adapter le tri à la taille des évènements à analyser.

Le pilotage du trieur et l’acquisition des données sont réalisés avec le logiciel Summit 6.2.

 

Sources d’excitation 355 nm
Sources d’excitation 405 nm
Sources d’excitation 488 nm
Sources d’excitation 561 nm
Sources d’excitation 640 nm

 

Filtres supplémentaires		Designation standard	Fluorochrome commun Liste non exhaustive
405 / 10 BP	400 - 410
513 / 26 BP	500 - 526	FITC
530 / 10 BP	525 - 535
561 / 14 BP	563 - 569
592 / 08 BP	584 - 596
642 / 10 BP	637 - 647

d : Dichroïque – LP : Long Pass – SP : Short Pass - BP : Band Pass

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Le laboratoire de culture mis à votre disposition est constitué d'un PSM, d'un incubateur à CO² et d'un évier. Le service possède un réfrigérateur/ congélateur, une centrifugeuse réfrigérée et une microfuge réfrigérée. Une machine à glace est accessible à proximité.

Ces équipements sont utilisables pour entreposer mommentanément du matériel biologique ou autre. Ce matériel devra être clairement identifié.

 

 

 

La station d'analyse du service est accessible gratuitement sur réservation LORA.

Les logiciels disponibles, d'analyse des données de cytométrie, sont :

Venturi One Version 6

FlowJo Version 10

Summit Version 6

Kaluza 1.3

Le logiciel de déconvolution des phases du cycle cellulaire : Modift version 3.3 est disponible sur l'ordinateur du cytomètre - analyseur LSRII. Contacter le service pour y avoir accès.